|
Диагностика играет одну из решающих ролей в системе мероприятий по борьбе с болезнями животных вирусной этиологии. Быстрый и правильно поставленный диагноз обеспечивает успех в ликвидации вспышки болезни, так как позволяет четко выяснить эпизоотическую ситуацию и своевременно принять целенаправленные меры по оздоровлению поголовья животных с наименьшими потерями. Для постановки диагноза требуется сбор, изучение, анализ и сопоставление целого комплекса различных данных. Поэтому диагноз — результат кропотливой и вдумчивой работы. На первом этапе диагностики используют данные, которые можно быстро собрать непосредственно в хозяйстве. К таковым относятся: l эпизоотологические данные, включающие свои сведения об охвате болезнью данного поголовья животных, скорости и территориальном распространении болезни, видах заболевших животных, динамике выявления больных и т,д. ; l клинические признаки болезни. Они включают определение (по сравнению с нормой) температуы тела, частоты и формы дыхания, частоты пульса, нарушение аппетита, поведение, состояния кожных покровов и слизистых оболочек, функционирования органов пищеварения, выделения т.д. ; l патологоанатомические изменения, которые обычно устанавливают при вскрытии павших животных. Различают макроскопические изменения (по сравнению с нормой) формы, размера, цвета, консистенции, появление узелков, кровоизлияний, везикул и другие образования, не встречающиеся в норме, а также микроскопические изменения в клетках и тканях, обнаруживаемые гистологическими методами. Чаще всего на основании этих данных можно поставить предварительный диагноз, так как многие вирусные болезни имеют сходные эпизоотологические данные, клинические признаки и патологоанатомические изменения ( например, парагрипп — 3, вирусная диарея, инфекционный ринотрахеит, распираторно - синцитиальная и аденовирусная инфекция крупного рогатого скота или болезни Ньюкалса и грипп птиц и др.). Кроме того, часто болезнь может быть вызвана не одним, а двумя и более этиологическими агентами ( например, вирусом и бактериями или двумя и более вирусами). Даже такое заболевание как ящур крупного рогатого скота, можно довольно уверенно диагностировать по эпизоотологическим, клиническим и патологоанатомическим данным, однако требуются лабораторные иследования типа и варианта возбудителя. Несмотря на ориентировочный характер предварительного диагноза, он играет весьма важную роль, так как он ориентирует ветеринарных специалистов на проведение соответствующих мероприятий. Окончательный диагноз на вирусную болезнь в большинстве случаев может быть поставлен только с учетом результатов лабораторных исследований. В лабораторной диагностике вирусных болезней точность дианоза прежде всего зависит от правильности взятия материала (пробы) от больных и павших животных, его транспортировки, качества приготовления и техники исследования вирусного материала. Материал для исследования следует брать как можно быстрее после проявления четких признаков болезни или не позднее 1-2 ч. после клинической смерти или убоя (позже начинается бактериальное обсеменение, и по мере продолжения инфекционного процесса количества вируса может уменьшаться в результате воздействия защитным механизмов организма). При взятии материала для выделения вируса следует исходить из патогенеза предполагаемй инфекции ( входные ворота, пути распространения вируса в организме, места его размножения, клинические признаки и пути выделения). В лабораторию направляют тот материал , который с наибольшей вероятностью может содержать возбудителей болезни. При этом необходимо соблюдать следующие общие правила: l материал должен быть взят строго асептически l материал должен быть немедленно законсервирован ( помещен в термос с охлаждающей смесью или добавлением 50-%- ного стерильного глицерина), чтобы предотвратить разрушение вирусов; l материал удобнее брать в стерильные пробирки с резиновой пробкой или во флакончики из под антибиотиков. Для исследования вполне достаточно 5-10 г. материала; l на пробиркак должна быть не смываемая этикетка; l материал направляют с нарочным и сопроводительным письмом, в котором указываю хозяйство, вид больных животных, предварительный диагноз, вид и количество патологического материала, на что следует провести исследование, дату и фамилию врача. В зависимости от симптомов болезни, а значит, и локализации возбудителя от больного животного может быть взят следующий материал: l смывы со слизистой оболочки носа, глаз, с задней стенки глотки, прямой кишки и клаоки у птиц. Берут их стерильными ватными тампонами, которые погружают в пробирки или флаконы, содержащие 3-5 мл соответствующей жидкости ( раствор Хенкса, среды Игла, 199 и др.) с антибиотиками; l содержимое везикул, пустул, стенки везикул, корочки на коже; l фекальные массы непосредственно из прямой кишки; l кровь на выделение вируса и кровь для получения парных сывороток крови для обнаружения и определения титра антител. Для этой цели кровь берут дважды у одного и того же животного - в начале болезни и через 2-3 нед, т.е. в начале и в концце болезни. От трупов патологический материал должен быть взят не пожзднее 1-2 ч после клинической смерти или убоя животного.В качестве патологического материала берут кусочки органов, которые: l имеют выдимые отклонения от нормы; l могут быть поражены и содержать вирус на основании клинической картины болезни; l наиболее часто содержат вирус: селезенка, печень, легкие, почки, головной мозг, лимфатические узлы. В лаборатории часть материала берут для исследования, оставшуюся часть хранят на случай дополнительных исследований. Затем составляют план исследования присланного материала, которые включапет следующие задачи: l обнаружение ( индикация) вируса в материале; l выделение ( изоляция) вируса из материала; l идентификация выделенного вируса; l при необходимости требуется доказать этиологическую роль выделенного вируса; l ретроспективная диагностика. Методы обнаружения вирусов в материале от больных животных и трупов. Для обнаружения вируса чаще всего используют экспресс-методы, которые позволяют в материале: 1. обнаружить вирусные белки (антигены), для этой цели используют серологические реакции: РИФ, ИФА, РНГА, РСК, РДП; 2. обнаружить вирусные нуклеиновые кислоты с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) или ДНК-зонда; 3. обнаружить вирионы вирусов. Электронная микроскопия позволяет обнаружить вирусы любых размеров, а крупные вирусы (вирусы оспы) можно увидеть под световым микроскопом. Этот метод называется вирусоскопия. Электроная микроскопия используется в основном в исследовательских целях. Электронный микроскоп - сложный и дорогой прибор, в диагностических ветеринарных лабораториях его нет. Хотя исследование с его помощью-очень эффективный экспресс-метод при диагностике рота-, коронавирусных и других инфекций. Если в материале содержится не менее 10-7 вирионов на 1мл, он не требует дополнительных методов очистки концентрации; 4. Обнаружить тельца - включения под световым или люминесцентным микроскопом. Тельца-включения – это внутриклеточные включения, образующиеся в клетках при репродукции в них некоторых вирусов. По природе они представляют собой либо скопления (колонии) вирионов, либо измененный под депйствием вируса клеточный материал, либо комбинацию первого со вторым. Тельца-включения могут находиться в цитоплазме ( чаще это РНК- содержащие вирусы) или в ядре (чаще это ДНК-содержащие вирусы, кроме вируса оспы), или в цитоплазме и ядре клетки (вирус чумы собак). Тельца-включения, образуемые некоторыми вирусами, получили специальное название, так, тельца-включения при оспе кур называются тельцами Боллингера, при чуме плотоядных - Ленца, при бешенстве Бебеша-Негри и др. При обнаружении телец Бебеша-Негри в мазках головного мозга погибшего животного наличие бешенства считается доказанным. При других вирусных инфекциях обнаружение телец-включений имеет лишь вспомогательное диагностическое значение; 5. обнаружить вирусные гемагглютинины, которые являются белками некоторых вирусов (орто-, парамиксовирусов и др). Гемагглютинирующие вирусы способны аггютинировать эритроциты животных определенных видов в условиях соответствующих температуры и рН среды. Иногда используют реакцию гемагглютинации (РГА) для обнаружения гемагглютинирующего вируса в материале ; 6. для обнаружения вируса в активной форме (инфекционной) используют довольно длительные вирусологические исследования. С этой целью применяют метод биопробы на живых чувствительных к предполагаемому вирусу системах: лабораторных животных, куриных эмбрионах, культурах клеток. В редких случаях приходится использовать естественно восприимчивых животных.
|
