|
Выделение вируса из исследованного материала - самый важный этап в диагностике вирусных болезней. Его проводят на живых чувствительных к предполагаемому вирусу системах: на животных: куриных эмбрионах и культурах клеток. Для заражения чувствительных систем из материала (кусочки органов и тканей) готовят суспензию. С этой целью материал измельчают, растирают в ступке со стерильным кварцевым песком, разводят стерильным физиологическим раствором или растворомХенкса (1:5-1:10), освобождают от крупных частиц путем центрифугирования в течении 20-30 мин.при 2000-3000 мин-1. За тем суспензию освобождают от бактерий и грибов, используя для этой цели антибиотики ( обычно смесь пенициллина стрептомицина по 200-1000 ЕД на 1 мл жидкости и нистатина), или пропускают через бактериальные фильтры (редко). Контролируют эффективность такой обработки посевом на питательные среды для аэробов, анаэробов и грибов. После получения отрицательного результата бактериологического контроля вируссодержащий материал используют для заражения живых объектов. Смывы для заражения готовят следующим образом. Тампоны, погруженные в специальный раствор, встряхивают 10-15 мин, тщательно отжимают, полученную жидкость центрифугируют при 2000-3000 мин-1 20 мин. Недостаточную жидкость отсасывают в стерильные пробирки, обробатывают антибиотиками и после бактериологического контроля используют для заражения. Из осадка клеток готовят мазки для РИФ. Полученной таким образом суспензией заражают чувствительные к предполагаемому вирусу живые объекты (животных, куриные эмбрионы, культуры клеток,) и регестрирует появления у них признаков размножения вируса, что служит показателем наличия вируса в исследуемом материале. Однако вирус не всегда проявляет действие в первом пассаже. В этом случае необходимо прровести 3-4 “пассажа”, чтобы вирус адаптировался к используемому живому объекту и накопился в количестве, достаточном для проявления своего действия.
|
