Методы бактериологическогоконтроля воздуха помещений: седиментации и аспирации

При отборе пробы воздуха на определение уровня микробного загрязнения необходимо придерживаться таких обязательных условий: пробу воздуха берут не раньше, чем через 30 мин после уборки помещения, при этом должны быть закрыты форточки, двери, высота взятия пробы должна отвечать высоте рабочего стола. Осуществлять контроль необходимо в стерильной технологической одежде из безворсой ткани и в перчатках.

Перед подачей прибора в "чистое" помещение его необходимо протереть салфеткой из безворсой ткани с обработанными краями, смоченной спиртом этиловым 76 %. Передача прибора в производственные помещения 1 и 2 классов и, желательно, 3 класса чистоты должна осуществляться через воздушный шлюз для материалов. Контроль чистоты воздух должен проводиться не реже 2 раз в неделю перед началом и во время производственного процесса в рекомендованных точках.

Определение микробного загрязнения воздуха помещений методом седиментаци заключается в седиментации (оседании) микрофлоры (находящейся в воздухе), под действием силы тяжести, на поверхность питательной среды.

 Этот метод используют для ориентировочной оценки микробной контаминации воздуха производственных помещений, преимущественно в помещениях с повышенным загрязнением воздуха и в тех случаях, когда невозможно исследование аспирационным методом (при использовании в производстве огнеопасных или взрывоопасных веществ).

В производственных помещениях контроль содержимого микроорганизмов проводят преимущественно в тех рабочих зонах, где находятся наиболее вероятные источники микробной контаминации воздуха (места с большим количеством персонала, повышенным риском образования пыли и т.д. ), а также в зонах, где субстанции, вспомогательные вещества и готовый продукт непосредственно контактируют с окружающей средой.

Посев осуществляют на открытые чашки Петри с мясо-пептонным агаром (для определения количества бактерий) и в отдельности с агаром Сабуро (для определения количества грибков). Чашки расставляют в нескольких местах помещений: в длинных и узких - в 4 точках по горизонтали на расстоянии не более 5 м одна от другой; в помещениях площадью до 15 м² - в двух противоположных точках помещения; больше 100 м² - в каждой из 4 противоположных точек и в центре помещения. После 10 мин экспозиции в открытом состоянии чашки закрывают и помещают в термостат.

 Посевы на мясо-пептонном агаре инкубируют при температуре 32,5 ± 2,5 °С, на агаре Сабуро - при 22,5 ± 2,5 ° С в течении 5 суток.

Учет результатов исследования. Для определения общего количества бактерий (грибков) в 1 м³ воздуха число выросших колоний на чашке умножают на один из множителей, представленных в таблице «расчет количества микроорганизмов в 1 м³воздуха при 10 мин экспозиции»:

Н-р: на чашке диаметром 10 см выросло 50 колоний бактерий. В перерассчете на 1 м³ воздуха общее количество бактерий составляет 50 х 60 = 3000.

Однако этот метод не дает полного представления о количественном содержании микроорганизмов. Это связано с тем, что оседание микроорганизмов зависит от скорости движения воздуха, которая может отличаться в разных точках помещения. Кроме того, при использовании этого метода плохо улавливаются мелкодисперсные фракции бактериального аэрозоля и при высеве одной частицы аэрозоля, который содержит несколько жизнеспособных микроорганизмов, вырастает только одна колония, которая снижает показатели общего микробного загрязнения воздуха.

 Поэтому седиментационный метод является приблизительным относительно оценки реальной степени микробной контаминации воздуха помещений. Тем не менее, он может служить для определения микробной контаминации воздуха в динамике, для оценки эффективности проводимых противоэпидемических мероприятий.

Определение микробного загрязнения воздуха аспирационным методом осуществляют с помощью пробозаборников инерционного типа - импактора или прибора для бактериологического анализа воздуха (щелевой аппарат Кротова, отсюда еще одно название метода: щелевой метод улавливания бактерий). В основу действия прибора положен принцип удара струи воздуха о поверхность питательной среды, которая помещается в чашке Петри.

При использовании аппарата Кротова воздух с помощью центробежного вентилятора всасывается через клиновидную щель, расположенную по радиусу над чашкой Петри. Диск, на котором закреплена чашка Петри, вращается со скоростью 1 оборот/сек, вследствие чего посев микроорганизмов происходит равномерно по всей поверхности питательной среды.

Местоположениеи количество точек взятия проб воздуха определяют в зависимости от размеров помещения (см. метод седиментации).

Чашку Петри с питательной средой помещают на диск прибора, тщательно закрывают крышку с помощью зажимов, установленных на его корпусе. Прибор включают в сеть, с помощью реометра устанавливают скорость движения воздуха - 25 или 40 л/мин. В среднем пробу воздуха отбирают в течение 5 мин со скоростью 40 л/мин.

После взятия пробы воздуха (из каждой определенной точки на две параллельные чашки Петри с МПА и средой Сабуро), чашки закрывают крышками и помещают в термостат. Питательные среды, температурный режим и время инкубации посевов такие же, как при исследовании воздуха методом седиментации (см. выше).

Учет результатов. Расчет осуществляют по формуле:

 Х= а х 1000 / в, где X - число микроорганизмов в 1 м³ воздуха; а - количество колоний, которые выросли на чашке Петри после срока инкубации; в - объем исследуемой пробы воздуха, приведенный к нормальным условиям (см. формулу приведения объема воздуха к нормальным условиям для аспирационного метода).

Еще один метод рассчета: подсчитывают количество колоний грибков и бактерий, которые выросли на параллельных чашках, определяют среднее арифметическое и умножают его на 5.

Полученные результаты сравнивают с допустимыми границами микробной контаминации воздуха данного помещения по соответствующим таблицам: «классификация производственных помещений по допустимому содержанию микроорганизмов и механических частиц в воздухе для производства стерильной продукции» и «классификация помещений производства нестерильных лекарственных препаратов по мах допустимому количеству частиц и микроорганизмов в воздухе».

Расчет минимального суммарного объема пробы воздуха в каждой контрольной точке осуществляют в соответствии с методическими рекомендациями по контролю содержания микроорганизмов и частиц в воздухе производственных помещений (Приказ МОЗ Украины от 14 декабря 2001 г. № 502).