Диагностическая стратегия и тактика в эпизоотологии

Значение и место диагностики в системе ППМ. Диагностика - «глаза и уши» эпизоотологии. Исторические аспекты отечественной ветеринарной диагностики.

        Основные  направления в диагностике инфекций:

• клинико-эпизоотологический анализ;
• макро- и микроскопическое исследование инфицированных тканей с целью выявления специфических поражений;
• микробиологические приемы выделения и идентификации возбудителей;
• серологические тесты для определения специфических антител или выявление динамики их нарастания.

Диагностические ситуации в эпизоотологии:

  Методология:

• патогенетические аксиомы - ворота инфекции, локализация инфекционного процесса и динамика его развития, локализация и специфика поражений, локализация возбудителя, симптомы и трансмиссия, циркулирующие системы, типичные поражения, выделения, паренхиматозные органы;
• анализ ситуации и формулировка диагностических задач - выделение и идентификация возбудителя, тестирование антител, патоморфологические тесты, виды и типы специментов;
• алгоритмы решения. Общая схема:

• множественное тестирование: параллельное, серийное (последовательное), ретестирование (негативного стада).

     Общие  требования к средствам и методам диагностики и их качественные характеристики:

• чувствительность (пропорция истинно положительных, «правильных» результатов) и специфичность (пропорция истинно отрицательных результатов);
• аутентичность, или соответствие - правильность выбора как теста, так и объекта);
• чистота, или точность - глубина, или уровень постановки диагноза по линии: симптом Þ этиология Þ идентификация возбудителя Þ нозология Þ разновидность возбудителя. Например, мастит Þ инфекционный Þ бактериальный Þ стафилококковый, или трахеобронхит собак Þ инфекционный Þ аденовирус собак Þ 2 типа;
• разрешающая способность, или обоснованность (достаточность) - необходимая полнота методического спектра диагностики по линии: клиника и симптоматика Þ биохимия, гематология, патоморфология Þ микробиология Þ серология Þ геномный или полипептидный анализ. Например, репродуктивные расстройства у свиноматок Þ гибель и рассасывание эмбрионов, мумификация плодов и мертворождаемость Þ выявление антигенов парвовируса свиней с помощью МФА в тканях пораженных плодов Þ определение сероконверсии в парных сыворотках свиноматок в отношении ПВС, сравнение титров IgM и IgG, или массовый острый лихорадочный синдром и угнетение у свиней всех возрастов Þ экстенсивный геморрагический диатез на вскрытии Þ выделение вируса КЧС в культуре клеток с помощью МФА Þ окончательное подтверждение биопробой на животных, или прогрессирующее исхудание взрослого КРС Þ персистентный лимфоцитоз Þ РИД-позитивность на лейкоз;
• прецизионость (статистическая достоверность);
• воспроизводимость (повторяемость в чувствительности и специфичности);
• достоверность (надежность, испытанность);
• ценность, стоимость;
• репрезентативность выборки.

     Семиотика (см. лекцию 7), патогномонические макро- и микроскопические признаки (на вскрытии и при патогистологическом исследовании):

• клиническое проявление инфекционных болезней;
• возбудитель и антигены в мазках-отпечатках, тельца-включения;
• дифференциальные таблицы (по клинической картине, макро- и микроизменениям).

                Микробиологическая диагностика:

• прямое обнаружение возбудителя - светооптическая и электронная микроскопия, иммуноэлектронная микроскопия, экспресс-методы, общие свойства - бактериальный рост, фильтруемость, патогенность для лабораторных моделей;
• метод флюоресцирующих антител, другие хромогенные субстраты и метки (ферритин, коллоидное золото);
• выделение возбудителя на биообъектах - биопроба, экспериментальная инфекция, моделирование, признаки (куриные эмбрионы, культура клеток, лабораторные и естественно-восприимчивые животные);
• количественные аспекты и разрешающая способность методов, количественные тесты, титрование, выражение;
• идентификация - культуральные, биохимические, генетические свойства и признаки, таксономия возбудителя.

      Серологическая диагностика:

• серологические реакции, методы серодиагностики, номенклатура, чувствительность и специфичность;
• качественные тесты с одним разведением сыворотки (РДП, РИД, РСК);
• тесты с серийными разведениями сыворотки (РН, РСК);
• тесты с прецизионными возможностями - иммуноферментный анализ и РНГА (количество), иммуноблотинг (качество, антигенный спектр антител);
• количественные измерения, выражение, тесты, разведения, логарифмическая трансформация (log₂), средние геометрические титры (СГТ);
• серотипизация и тесты.

     Организационно-правовые основы:

• нормативно-техническая документация;
• силы и средства, уровни решения проблем (ветлаборатории, НИУ, прецизионные центры), ответственность;
• материально-техническое обеспечение (приборы, реактивы, биопрепараты, их разработчики и производители), стандартизация и сертификация.

    Интерпретация результатов:

• статистическая обработка, количественное выражение и достоверность результатов;
• истинно положительный и отрицательный результаты, принципиальные различия их получения и реализации;
• ложно-положительные результаты и их причины - перекрестные реакции, неспецифические ингибиторы, неспецифическая агглютинация;
• ложно-отрицательные результаты и их причины - естественная или индуцированная толерантность и супрессия (например, вирусная диарея+лейкоз КРС в РИД), неверно выбранные время тестирования или сами тесты, неспецифические ингибиторы (антикомплементарность сыворотки, токсичность для субстратов, неполные или блокирующие антитела, недостаточная чувствительность тестов).

Целевые возможности диагностических направлений и отдельных методов в решении общих и частных эпизоотологических задач (см. выше). Место и уровни.

Дифференциальная диагностика и ее эпизоотологическое значение при инфекциях различных категорий.

     Прецизионный анализ в диагностике инфекций. Цели, задачи, методы и уровни решений.

     Проблема дифференциации постинфекционного и поствакцинального иммунитета.

    Определение и принципы серологической эпизоотологии:

• серопозитивность, серонегативность, сероконверсия;
• аналитическая специфичность и титры - предельные возможности, обеспечение чистоты, или точности диагноза, выявление минимальных «следов» инфекции, как правило скрытой;
• диагностическая специфичность и титры - оптимальные расчетные (эмпирически) значения, коррелирующие с показателями других тестов (как правило клиническо-морфологических), подтверждение достоверности и достаточности диагноза.

    Индикация возбудителей инфекций как система:

• цели и задачи;
• микробиологические объекты ветнадзора;
• методологические принципы исследования внешней среды.

           Лабораторные инфекции и способы их предупреждения.